警惕新的圆环病毒PCV3漂洋过海杀入中

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猪圆环病毒相关疾病(PCVAD),是目前危害养猪业的一个主要疾病。临床表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS),呼吸道和肠道疾病,繁殖障碍和猪皮炎和肾病综合征(PDNS)。虽然有些临床症状的发生有其他因素的关系,但是猪圆环病毒2型PCV2是PCVAD的最重要诱因。自从年圆环病毒2型疫苗开始普及以来,圆环病毒病得到了很大程度的控制。但是,道高一尺魔高一丈!新的圆环病毒来势汹汹。

猪圆环病毒家族又添一员

——PCV3来势汹汹

年,在美国北卡罗来纳州的一个农场里,母猪出现各种生殖问题,包括高于平均水平的母猪死亡率和低于平均水平的受孕率等与PDNS一致的临床症状。同时,在同一农场收集的木乃伊胎儿也有类似的临床症状。

虽然母猪的组织病变与PDNS一致,但组织样本通过IHC分析和定量PCR(qPCR)检测均显示PCV2阴性。基因组测序显示发现一种全新的,不同基因型的圆环病毒——称为PCV3。

Fig.北卡罗来纳州农场感染PCV3母猪和木乃伊胎儿临床症状

通过PCR和IHC分析,PCV3可在具有PDNS样病变的母猪的皮肤、肺、肾脏和淋巴结中检测到,而以上方法加上宏基因组序列分析都未能在北卡罗来纳州收集的样品中检测出PCV2,由此可说明,PCV3感染即可能导致PDNS样病变产生。而导致母猪流产及在胎儿检测到PCV3则是病毒垂直传播的结果,流产胎儿中能够检测到高达7.57×gc/ml(基因拷贝数/毫升)滴度的PCV3病毒。

除了此次分离的样品之外,研究人员将之前分离具有PDNS临床症状,通过一系列检测却证明为PCV2阴性的样品,重新进行针对PCV3的鉴定并且测定猪血清中PCV3抗体情况。结果表明,PCV3在美国猪群中广泛流行。为了进一步调查PCV3的流行率,用qPCR分析提交至爱荷华州立大学兽医诊断实验的个需要进行呼吸系统疾病诊断测试的样本,其中有34个样本(12.5%)为阳性,滴度为3.00×?1.52×gc/ml(基因拷贝数/毫升)。

对PCV3进行基因分析,环状单链DNA,bp,目前发现3个ORFs编码超过个氨基酸,其中两个ORF与圆环病毒的rep和cap蛋白同源,ORF3编码蛋白功能未知。而PCV3的cap和rep蛋白与PCV2及蝙蝠圆环病毒对应蛋白氨基酸序列相似性分别仅有37%和55%。

Fig.PCV3基因图谱

为了研究PCV3与其他种属环状病毒的进化关系,比对分析了2个PCV3与23个不同种属圆环病毒的基因组序列。

PCV2与9年分离的PorkNW2/USA/9毒株远离于其他种属病毒处于一独立的进化分支。系统发育分析表明PCV3与犬圆环病毒(KC)关系最密切。

环状病毒具有遗传多样性,感染宿主广泛,并能跨种群传播。系统发育分析表明PCV3与犬圆环病毒之间的进化关系最为密切。很巧合的是,犬圆环病毒是通过犬肝脏出现坏死性血管炎和肉芽肿淋巴结炎鉴定,而这两个临床症状都在PCV3感染的母猪中观察到。与犬圆环病毒一样,体外繁殖PCV3的尝试并不成功。

以上特征引出了PCV3来源的疑问:

(1)PCV3是已经在猪群中存在一段时间,只是没有被检测到;

(2)该病毒是通过跨种群播而来;

(3)亲本未明的圆环病毒进行重组获得的自带病毒。

警惕!PCV3漂洋过海,杀到中国!

国内有的,国外不一定会有。但是国外有的,国内基本早晚都会有。

年3月开始,辽宁、江西、重庆三个农场共有头母猪出现繁殖障碍,新生仔猪数量急剧下降等问题。

在这三个农场中,怀孕母猪的流产率为5.2%?20.1%,而母猪的死亡率为5.4%?10.5%。RT-PCR鉴定猪的多种常见病原包括猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2、蓝耳病毒、猪传染性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒及猪瘟病毒都没有在样品中检测到。PCV3是在这三个案例中唯一检测到的抗原。

关于PCV3的地域分布,流行率,组织嗜性、致病机制以及在中国的起源尚属未知。

为了更好地了解PCV3在中国的感染状况,流行状况,地理分布,潜在的致病性和遗传特征等,研究人员从11个省(安徽、重庆、福建、河北、河南、湖南、江苏、江西、辽宁、沈阳和浙江)35个农场收集了个样本(包括死胎、组织、精液和血清样本)进行鉴定。

35个农场中有24个检测到PCV3,阳性率为68.6%。全部个样本中,PCV2和PCV3的阳性率分别为62.2%(/)和34.7%(77/)。PCV3和PCV2的共感染率为15.8%(35/),即PCV3的单独感染率为18.9%(42/)。值得注意的是,此次研究中来自11个省份的样本均检测到PCV3,说明其在中国已广泛存在。

而在PCV3阳性的样本中,病毒的不同组织鉴定情况如下表:

PCV3可以从不同的猪组织中检测得出,死胎和精液样本中的PCV3阳性检测结果表明PCV3具有垂直传播的风险。

分离得到的9株PCV3毒株全基因组(分离自福建,江西,河南和重庆)与33段cap蛋白部分基因序列(来自安徽、河南、福建、湖北、辽宁和重庆)上传到GenBank。另外下载GenBank中26个圆环病毒基因组序列进行序列比对分析。

不同种属圆环病毒完整基因组的系统发育分析结果显示:

(1)本文中提到的9个PCV3中国分离株(图中红色方框指示)与美国分离株(PCV3/USA/MO[KX.1]图中蓝色箭头指示)位于同一大分支。

(2)中国分离株与美国分离株全基因组和cap蛋白基因序列相似性分别为99.0%-99.1%和98.4%。

(3)这9株中国分离株病毒之间全基因组和cap蛋白基因序列相似性分别为99.0%-%和98.4%-%。

(4)毒株之间cap蛋白基因序列的差异程度高于全基因组。

(5)中国分离的PCV3分为两个亚群,分别是3a和3b,而美国分离株则属于3a亚群。

PCV3与中国蝙蝠圆环病毒(图中绿色大括号及箭头指示)进化关系密切。对两者的遗传关系进行分析,发现蝙蝠圆环病毒和PCV3分离株在-位和-位核酸有2个重组区域,提示PCV3可能来源于蝙蝠圆环病毒重组。

PCV3在年美国首次被鉴定,年在美国北卡罗来纳州一个农场被分离并确定为猪病致病原,年3月开始陆续在中国多省被检测出,除了文中提及的11个省,年广东也有分离到PCV3的报道,毒株为PCV3-China/GD(KY)。

由此可见PCV3在我国流行程度已经相当广泛,然而对于这个病毒的情况目前还是知之甚少,对于PCV3的生物特性、致病性及对于其单独感染和共感染情况还需要更深入的研究探讨。

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